2000 年，德國(guó)科學(xué)家 StefanHell 開發(fā)了另一種超高分辨率顯微技術(shù)，其基本原理是通過物理過程來(lái)減少激發(fā)光的光斑大小，從而直接減少點(diǎn)擴(kuò)散函數(shù)的半高寬來(lái)提高分辨率。當(dāng)特定的熒光分子被比激發(fā)波長(zhǎng)長(zhǎng)的激光照射時(shí)，可以被強(qiáng)行猝滅回到基準(zhǔn)態(tài)。利用這個(gè)特性，Hell 等開發(fā)出了受激發(fā)射損耗顯微技術(shù) (stimulated emission depletion，STED)。其基本的實(shí)現(xiàn)過程如圖 2 所示，就是用一束激發(fā)光使熒光物質(zhì)(既可以是化學(xué)合成的染料也可以是熒光蛋白)發(fā)光的同時(shí)，用另外的高能量脈沖激光器發(fā)射一束緊挨著的、環(huán)型的、波長(zhǎng)較長(zhǎng)的激光將**束光斑中大部分的熒光物質(zhì)通過受激發(fā)射損耗過程猝滅，從而減少熒光光點(diǎn)的衍射面積，顯著地提高了顯微鏡的分辨率，原理見下圖。、

STED 成像技術(shù)的*大優(yōu)點(diǎn)是可以快速地觀察活細(xì)胞內(nèi)實(shí)時(shí)變化的過程，因此在生命科學(xué)中應(yīng)用更加廣泛。

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